cell 깨는법
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작성일 19-09-25 11:57
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Whole cell protein을 얻을 때 적당하다.
2) 조성
- pH 8.0
- Tris 50mM
- NaCl 150mM
- SDS 0.1% (m/v)
- Na-Deoxychlolate 0.5% (m/v)
- Triton X-100 or NP-40 1% (v/v)
- 사용하기 직전에 protease inhibitors 추가
Sonication (time for lysis: 2 min per 1g cell)
1) 理論(이론)
Sonicator로 cell wall에 진동을 발생시켜 물리적으로 파괴.
2) 사용법
Cell을 선택한 buffer로 wasing 후 sonication
위상차 현미경 하에서 sonication 강도와 시간에 따른 cell의 파괴 정도를 check하여 최적 조건을 찾아둔다.
3) 주의사항
거품(protein의 denaturation을 일으킴) 발생 주의
Sonicator의 probe는 작동하는 동안 항상 soln.에 잠겨 있도록 함.
Enzyme Digestion (time for lysis: 15-30 min per 1g cell)
1) 理論(이론)
lysozyme을 이용, cell lysis
TE buffer: 50mm Tris-HCl (8.0), 10mM EDTA
2) 사용법
1. 1g의 cell 당 3ml의 TE buffer washing, 20-37℃ 배양.
2. cell suspension 5ml 당 1 mg의 lysozyme (10 mg/ml stock)을 첨가.
3. 20-37℃ 10-20 min shaking
…(투비컨티뉴드 )
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다. RIPA는 Radioimmunoprecipitation assay buffer의 약자이다.
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(Cell 깨는 법)
Cell안의 단백질을 획득하기 위하여 사용한다.
Organic Solvent Lysis - RIPA buffer
1) 定義(정이)
RIPA buffer는 가장 널리 쓰이는 cell & tissue lysis buffer이다.
