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LacZ를 이용한 Color selection...

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lactose가 없을 때에는 inhibitor region에서 생성된 inhibitor가 promoter 영역의 operator부분에 결합하여 RNA polymerase 가 활동하는 것을 방해하므로 불필요한 유전자인
β-galactosidase는 생성되지 않는다.
그러나 lactose 가 배지에 있으면 이 물질이 inhibitor와 결합하여 operator에 있는 inhibitor를 떼어내고 RNA polymerase가 잘 작용하여 mRNA를 만들고,β-galactosidase를 만들면서 lactose를 분해하게 한다.
LacZ를 이용한 Color selection...



LacZ를 이용한 Color selection...

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순서
◎ LacZ를 이용한 Color selection
Lac operon이란 박테리아에서 시행되는 유전자 발현 조절기구로 E. coli가 lactose를 galactose와 glucose로 분해하는데 필요한 효소인 β-galactosidase를 만드는 유전자이다.
이런 유전자 조절 기구를 實驗에 이용하고자 하는 것이 바로 LacZ인데 이 부분을 plasmid에 삽입해 놓게 되는데 이때 LacZ operon이 동작하고 있는가 확인하기 위해서 IPTG와 X-Gal이라는 두 가지 물질을 사용한다.
▶ IPTG
LacZ gene inducer역할로 Lactose대신 inhibitor와 결합하지만 분해되지는 않는다.

◎ Selection의 결과
결과)) ▶Blue colony
LacZ의 MCS(Multiple cloning site)에 DNA가 재조합되지 않은 박테리아의 colony는 LacZ가 제 기능을 발휘하여 X-Gal을 대사시키므로 푸른색이 된다
▶White colon…(省略)
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설명



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레포트/공학기술

다.
▶ X-Gal (5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranosidase)
Lactose 대신 β-galactosidase에 의해 대사되는 물질로 원래는 무색이지만
β-galactosidase에 의하여 대사되면 푸른색을 띤다.

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